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实验冷冻组织研磨机研磨提取小鼠内脏组织提取核酸实验步骤

作者:上海测博 文章来源:上海测博 点击数: 发表时间:2020-07-23 15:00

  冷冻组织研磨机常常在实验中出现,可用范围广,耐用程度高,这次研磨主角是-小鼠内脏组织,在这里测博用了两种方式进行实验操作,下面把详细的操作步骤记录并分享给更多实验员。

  冷冻组织研磨机研磨提取小鼠内脏组织方法一:加裂解液直接匀浆

  1、取适量组织装入离心管,组织尽量剪碎成小块;

  2、在离心管中加入氧化锆珠数颗(一次性使用);

  3、先加入试剂(不建议加入太多,液体体积过大影响匀浆效果),盖好管盖,装入组织研磨机适配器中。

  4、组织研磨机研磨参数设置为一定转速,研磨时间为2~5min

  注意:不同组织研磨时间不同,脑1min,肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min,可能更长,中间应停顿1~2次防止温度过高,研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷;

  5、再加入适量试剂至总体积后按照说明书上进行后续操作即可;

  方法二:先匀浆,再取一定量液体加裂解液进行核酸抽提,适用提取小鼠组织中的病毒的核酸

  1、取适量组织装入离心管,组织尽量剪碎成小块,样品量较多时使用大离心管;

  2、在离心管中加入氧化锆珠数颗,使用大离心管时,可以将氧化锆珠数量增加;

  3、加入适量的灭菌PBS或生理盐水,总体积为离心管单管体积的1/3~1/2为好,盖好管盖,装入测博组织研磨机适配器中,安装上机(研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷)。

  4、组织研磨机参数设置为一定转速,研磨时间为1~5min(不同组织研磨时间不同,脑1min,肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min,可能更长,中间应停顿1~2次防止温度过高),若研磨不充分,可以继续研磨到充分为止;

  5、一定温度、转速,离心数分钟;

  6、取上清液按照试剂盒说明书进行后续提取步骤。方法1中,我们之前试过一齐加1ml的试剂,可能是体积过大,反而匀浆效果不好,所以就改成先加一部分裂解先匀浆,然后再补齐1ml体积进行。

冷冻组织研磨机图片

  使用后要记得对研磨机进行维护保养操作哦:

  1、妥当的存储:如较长时间不使用研磨机器和研磨夹具,应将研磨夹具浸在氯乙烷里用超声波清洗,然后涂上保护油保存在专用工具箱里。

  2、清水洗净:每次研磨完成后,或者要停止研磨一段时间,都应将机器上所有的研磨液,用水彻底清洗干净,否则,残留的研磨液和研磨水将会变干、变硬或渗到研磨机内对机器造成损坏。

  3、替换润滑油:观察研磨底盘下面的油脂,定期更换与补充新油脂,保护研磨底盘以及研磨底盘的支撑面,不要受异物的污染、撞击,研磨机正常工作时15-20天应对研磨底盘润滑油进行更换。

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