本试剂盒采用多重荧光PCR技术，针对猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、轮状病毒A型（RV-A）3种最常见肠道病毒特有基因的序列，设计不同荧光信号标记的探针，通过荧光信号的变化检测猪肠道样本中是否含有这三种病毒。

储存条件及有效期：试剂盒置于-20℃冰箱中冻存，试剂盒有效期为一年。

产品特点 Features

操作流程 process

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、轮状病毒A型三重荧光RT-PCR检测试剂盒操作流程：

1）从试剂盒中取出DEPC水、RT-PCR反应液、P溶液、阴性和阳性核酸对照，室温融化，酶混合液置冰箱4℃待用。

2）取待检样本（100μL）用Trizol法或柱法或磁珠法提取RNA，并溶解于50 μL DEPC水中。

3）配反应体系：试剂使用前，振荡混匀，3000rpm离心2秒。

在0.2mL平盖PCR薄壁管或平盖PCR八联管中，按上述体积加入反应体系液（阳性和阴性对照管同样配制，待检RNA溶液换为试剂盒提供的阳性核酸对照和阴性核酸对照，加样量分别为3μL），盖好管盖，去除管中气泡，并用离心机甩离，确保所有液体都在管底。将PCR 管放入荧光PCR检测仪中。

4）荧光PCR检测仪循环条件设定。

产品细节 Details

技术参数 parameter

质控标准：

阴性对照的CT值应等于None；同时阳性对照的CT值应小于等于30。

否则，此次试验视为无效。（CT值应以S型曲线拐点的循环数为准）

结果判定：

1）CT值为None的样本判定为阴性；CT值小于等于38的样本判定为阳性。

2）CT值大于38的样本建议重做。重做后CT值为None判定为阴性，否则判定为阳性。

3）对于某些未呈现S型曲线，但本底较高的样本，应判定为阴性。

实验案例展示